Cistro磁力架的應(yīng)用之NGS建庫(kù)篇
在當(dāng)今科技發(fā)展飛速的時(shí)代,NGS(Next Generation Sequencing)建庫(kù)技術(shù)作為DNA世界的密碼解讀者,正扮演著越來越重要的角色,已在癌癥基因檢測(cè)、遺傳疾病篩查、微生物組研究等領(lǐng)域大放異彩,為科學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)帶來了革命性的變革。

NGS流程上大致可分為:樣本核酸提取→文庫(kù)構(gòu)建→靶向捕獲→上機(jī)測(cè)序→生信分析。建庫(kù)技術(shù)的核心是將待測(cè)的DNA/RNA分子轉(zhuǎn)化為能夠被高通量測(cè)序儀器讀取的文庫(kù),從而獲取包含重要生物信息的序列數(shù)據(jù)。以DNA建庫(kù)為例,建庫(kù)流程包括:DNA片段化→末修加A→接頭連接→純化分選→文庫(kù)擴(kuò)增→文庫(kù)純化。

在純化分選階段,一般采取兩步磁珠純化,其優(yōu)勢(shì)是通過調(diào)整磁珠懸浮液與DNA樣本體積比例選擇性地結(jié)合不同大小的DNA片段,能有效去除接頭、酶、dNTPs、PCR引物、引物二聚體、鹽離子和其它雜質(zhì)。根據(jù)磁珠優(yōu)先吸附大片段原理,通過使用不同體積磁珠,第一步磁珠純化去除大片段,第二步磁珠純化去除小片段,從而得到合適片段長(zhǎng)度文庫(kù)。在這之中反應(yīng)管多次置于磁力架上,通過吸附磁珠分離液體,避免了離心損傷,支持高效回收。

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